• 上皮细胞培养
  • 点击数:  发表日期:2007-12-29
  • 上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮组织,故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞,培养时生长速度往往超过上皮细胞,并难以纯化,同时上皮细胞难以在体外长期生存,因此纯化和延长生存时间是培养关键。
        体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜,因此培养在有胶原的底物上可能利于生长,另外人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞为饲养层(用射线照射后)时,细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低PHCa2+含量和温度,向培养基中加入表皮生长因子,均有利于表皮细胞生长。
        以表皮细胞为例,用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞,其法如下(黑木凳志夫  1981
        1、取材:外科植皮或手术残余皮肤小块,早产流产儿皮肤更好,取角化层薄者,切成0.51平方厘米小块。
        2、置0.02%EDTA中,室温,5分钟。
        3、换入0.25%胰蛋白酶中,4℃过夜。
        4、分离:取出皮块,用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。
        5、取出表皮,剪成更小的块后,置0.25%胰酶中,37℃,3060分钟。
        6、反复吹打,制成悬液。
        7、培养:用80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸去上清。
        8、直接加入培养基(Eagle20%小牛血清)制成细胞悬液,接种入培养瓶,CO2温箱培养。