• 细胞培养常见问题及回答(二)
  • 点击数:  发表日期:2007-12-29
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    室温下(25)配制的Tris-HCl溶液,在37使用时PH值是多少?

    缓冲液的PH值随温度变化而变化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在42537时,不同的PH值。

    4°C

    25°C

    37°C

    8.1

    7.5

    7.2

    8.2

    7.6

    7.3

    8.3

    7.7

    7.4

    8.4

    7.8

    7.5

    8.5

    7.9

    7.6

    8.6

    8.0

    7.7

    8.7

    8.1

    7.8

    8.8

    8.2

    7.9

    8.9

    8.3

    8.0

    9.0

    8.4

    8.1

    9.1

    8.5

    8.2

    9.2

    8.6

    8.3

    9.3

    8.7

    8.4

    9.4

    8.8

    8.5

    昆虫细胞培养的最适PH值和渗透压是多少?

    生长培养基的PH值对细胞的增殖和病毒或重组蛋白的生产均会产生影响。对于大部分鳞翅类昆虫细胞系,在PH 6.06.4范围的大部分应用效果良好。培养鳞翅类昆虫细胞系时,培养基的最适渗透压是345-380mOsm/kg.。为保证可靠和持久的细胞培养方式,减少技术问题,保持PH值和渗透压在以上所列的范围之内。

    High Five细胞有任何其它名称吗?

    High Five细胞也被称为Trichoplasia ni 5B1-4BTI-TN-5B1-4

    PFHM-II HYBRIDOMA-SFM之间有什么差别

    PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白质的单克隆抗体生产培养基。如果作为杂交瘤生产培养基使用,PFHM-II可能需要补充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM既是杂交瘤生产培养基,也是单克隆抗体生产培养基。它包含低水平的蛋白质。

    High Five无血清培养基中去污剂的浓度是多少?

    High Five无血清培养基中去污剂的浓度:0.025 g/L Tween-801.0 g/L Pluronic Poly-all

    High Five细胞用多大的密度冻存?

    3.0x10E6 cells/ml

    在我的果蝇培养基中发现形成白色沉淀,加热后溶解。它是什么?对我的细胞有害吗?

    可能是谷氨酰胺沉淀,但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培养基中谷氨酰胺的浓度比典型的2mM6倍。酪氨酸的浓度比在RPMI 1640中高25倍,而且比谷氨酰胺更加难以溶解。沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存在局部温度较低的地方引起。只要沉淀在培养条件下可以溶解,对实验不会有不利的影响。

    如何从T25瓶中转移sf9细胞?能用胰蛋白酶消化吗?

    我们强力推荐使用脱落细胞的方法,因为这项技术破坏性最小,生活力最高。正如手册上所显示,通过使用巴斯德吸液管,让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在绝对必要的情况下,才使用胰酶消化细胞。

    胰酶消化一个T25瓶的sf9细胞:

     

    1.

    去除培养基。

    2.

    2ml 1xPBS(足以覆盖细胞表面)洗涤细胞,去除PBS

    3.

    加入2ml 1x胰酶EDTA(恰好覆盖细胞表面)。

    4.

    37 孵育510分钟。在仪器下检测看到5<, /SPAN>分钟后它们正在向上移动。

    5.

    向细胞中加入2ml 细胞培养液,移入锥形管,用2ml培养液洗瓶壁,移入同一锥形管中。(培养基中的FBS终止了胰酶的活性。)

    6.

    离心(1100rpm)沉淀细胞。去除培养基。

    7.

    用新的培养基重新悬浮细胞。传代。

    Sf9, Sf21, high Five细胞悬浮培养时,肝素的使用量是多少?

    为了防止悬浮培养细胞聚集的形成,使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。

    在重新冻存sf9细胞前,它可以传多少代?随着传代的次数的增加,它的感染能力会降低吗?

    通常情况当细胞经过30次传代后,应该返回冻存。无论什么时候计数时,都应该检查细胞活力。如果超过95%的细胞保持有活力和在大约30小时左右加倍,细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降,它们的感染力将不在是有效的。

    Tech tips

    贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基,可能在放置几天后颜色变紫。这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时,碳酸氢纳导致了pH值的上升。您可以在使用前松开瓶口,在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟,来校正溶液的pH值(确定松开瓶口以保证气体交换)。

    如果细胞培养基偶然被冻,您应该熔化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生,培养基可以正常使用,如果出现沉淀,只能丢弃这些培养基。

    您要查找培养基成分表吗?您可以在GIBCO 目录第一章的后面或在我们网站的技术资源部分找到。

    当在无血清培养基中添加抗生素时,降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下,抗生素不被灭活,可能对于细胞达到毒性水平。

    一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

    总之,大部分添加物和试剂最多可以冻融3次,如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,将会影响它的性能。

    在进行传代培养时,我们强烈推荐进行台盼兰活性记数。研究者常常通过一个简单的稀释(1412)进行传代,不进行活性检测,您可能接种比你认为的低的多的浓度的细胞,这常常可能导致生长缓慢或培养物根本不生长。

    在溶解的一周内使用贮存在4冰箱中的液体胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4就可能开始降解,如果在室温下放置超过30分钟,就会变得不稳定。

    ● GIBCO 产品的贮存期立足于实时稳定性研究结果。产品说明在超过指定的贮存期的一段时间内,产品仍然在可接受的范围内,但是由于在超过指定的效期后,产品的性能和稳定性没有检测,我们不推荐使用过了效期的产品。