• 生物素-亲和素系统在ELISA中的应用
  • 点击数:  发表日期:2012-8-6
  •  BAS-ELISA

     
    生物素-亲和素系统(BAS)是一种具有高亲和力、灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点的信号放大标记技术,BAS具有高灵敏度、高特异性、高稳定性和适用性等特点。生物素易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合,再和生物素衍生物结合,将信号多级放大,能保持大分子物质的原有生物活性。
    亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每个分子由4个亚基组成,可以和4个生物素分子亲密结合,现在使用最多的是从链霉菌中提取的链霉亲和素链霉亲和素(Streptavidin)是一种可以链霉菌属细菌Streptomyces avidinii中纯化获得的四聚体蛋白,大小为52800 Da。链霉亲和素称链霉抗生物素蛋白生物素广泛分布于动、植物组织中,以卵黄和肝组织含量较高,分子质量244.31 ku。亲和素亦称抗生物素或卵白素,是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白。 亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力,其反应呈高度专一性,特异性强,亲和素与生物素的结合,虽不属免疫反应,由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置,可以连接更多的生物素化的分子,形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来,就可大大提高ELISA的敏感度,而且生物素和亲和素一旦结合,就极为稳定,不受在ELISA方法中的保温及多次洗涤影响,而且这种结合反应时间比抗原抗体反应所需时间短;生物素或亲和素与抗体分子或标记物结合后,既不影响前者的亲和力,也不改变后者的特性。亲和素分子的4个活性部位并非都和连接在抗体分子上的生物素残基结合,剩下的游离部位尚可作为另一种生物素标记蛋白质的受体。
    亲和素-生物素系统在ELISA中的应用有多种形式,可用于间接包被,也可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素,原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合,通过亲和素-生物素反应而使生物素化的抗体或抗原固相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量,而且使其结合点充分暴露。另外,还可以用生物素化的抗体替代常规ELISA中的酶标抗体,然后连接亲和素-酶结合物,从而使反应信号放大,提高检测的灵敏度。
     
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