• 常用的淋巴细胞分离液介绍
  • 点击数:  发表日期:2012-7-16
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    常用的淋巴细胞分离液介绍
     
    淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异,借助离心产生的重力加速度,进行细胞的分离纯化的常用试剂。常用的淋巴细胞分离液有Ficoll淋巴细胞分离液、Percoll淋巴细胞分离液。FicollPercoll分离单个核细胞的方法均为密度梯度离心法。
    1Ficoll-Hypaque密度梯度离心法
    Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,吸水性强,平均分子量为400,000,当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞,其体积、形状和比重与其他细胞不同,红细胞和多核白细胞比重较大,为1.092左右,而淋巴细胞和单个核细胞比重为1.075左右。利用密度在1.077±0.001g/L之间近于等渗的Ficoll-Hypaque混合溶液(称为淋巴细胞分层液)作密度梯度离心时,各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集,红细胞与粒细胞由于密度较大,故沉于分层液的底部;淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重,故位于分层液界面上,这样就可获得PBMC
    总之:Ficoll只能分离出密度在1.077±0.001g/L之间的淋巴细胞

    2Percoll密度梯度离心法:
    Percoll成分为硅化聚乙烯吡咯烷酮(PVP),为无毒,无刺激的新型密度梯度离心分离剂。聚乙烯吡咯酮包被的硅胶混悬液,它具有易成等渗、粘度低、无毒性、不引起细胞聚集等优点,已得到广泛引用。由于Percoll在培养基中颗粒大小不等,其在离心过程中自然形成密度梯度,从而将不同密度的细胞分离出来。将110×PBS9percoll储存液混合,制成等渗Percoll悬液,此悬液被认为是100 % Percoll悬液,其密度为1.1294g/ml,可通过用PBS(1x)或组织培养液稀释此100%Percoll而获得适宜密度进行细胞分离,因为稀释度与密度线性相关,常用的密度如下:
    70% Percoll 1.090g/ml
    60% Percoll 1.077g/ml
    50% Percoll 1.067g/ml
    40% Percoll 1.056g/ml
    30% Percoll 1.043g/ml
    20% Percoll 1.031g/ml
    通过几个由高到低稀释度的叠加,形成与混合细胞的各组分细胞相应比重的梯度,达到可以将不同密度的细胞区分开来.
    总之:PERCOLL能将全血中的多种细胞分离出来。
     
    另外,不同的来源的血液要使用不同密度的的淋巴细胞分离液:
    1 人淋巴细胞分离液 0770 1.0770±0.0001
    2
    大鼠淋巴细胞分离液 0830 1.0830±0.0001
    3
    小鼠淋巴细胞分离液 0920 1.0920±0.0001